科研血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。景源實(shí)驗(yàn)技術(shù)介紹一下在科研血清實(shí)驗(yàn)中常見的一些問題。
1、如何貯存和凍結(jié)血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但有必要注意的是，融解過程中有必要規(guī)矩地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)刻貯存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而構(gòu)成沉積或可見的混濁。因而，推薦在-20℃以下貯存血清，并防止反復(fù)凍融。主張血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若一次無法用完一瓶，主張無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉積，它們是什么，怎樣處理?
這些沉積包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除掉沉積，離心血清(400g，1-2分鐘)或許簡(jiǎn)單的讓其沉積在瓶子底部，將血清小心地轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不主張選用過濾的辦法除掉沉積，由于沉積會(huì)堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉積并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，運(yùn)用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉積會(huì)天然消失。
3、如何防止血清中發(fā)作沉積?
按如下操作可防止沉積的發(fā)作：
(1)凍結(jié)血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，削減沉積的發(fā)作。
(2)血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)矩?fù)u晃均勻(當(dāng)心勿形成氣泡)，使溫度與成分均一。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃凍結(jié)，因溫度改變太大，簡(jiǎn)單形成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)作沉積。
(4)勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得污濁，一起血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因而受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。
(5)若有必要做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)刻過久或搖晃不均勻，都會(huì)形成沉積物的增多。
在ELISA實(shí)驗(yàn)的過程中，血清培養(yǎng)是很重要的步驟，但是在這過程中也會(huì)出現(xiàn)一些的問題，比如說，在培養(yǎng)進(jìn)程中會(huì)出現(xiàn)一個(gè)個(gè)“小黑點(diǎn)"的現(xiàn)象，這是怎樣一回事呢？接下來就為大家解析一下這個(gè)現(xiàn)象出現(xiàn)的原因以及解決方法。
我們一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中有黑點(diǎn)，我們先不要著急，也不要慌張，要搞清楚這個(gè)黑點(diǎn)是什么?什么構(gòu)成的?首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀況，黑點(diǎn)是否游動(dòng)等。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)不斷繁衍，培養(yǎng)基就會(huì)敏捷變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀況出色，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前比較，沒有任何改變，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)或許與以下幾種狀況有關(guān)：
第一，細(xì)胞生長(zhǎng)過老，黑點(diǎn)是破碎的細(xì)胞殘骸
第二，血清質(zhì)量欠好，重復(fù)凍融的效果
第三，制作培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng)
第四，制作培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格(可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn))
第五，培養(yǎng)的原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)(或許是原代組織中的雜質(zhì)，屢次傳代能夠消除)。
那么我們?cè)鯓臃乐购邳c(diǎn)生成呢？一般要做到以下幾點(diǎn)：
(1)盡可能減少血清凍融次數(shù)。
(2)培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3)培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2。
(4)嚴(yán)格控制制作培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定時(shí)沖刷。
(5)掌握細(xì)胞傳代的機(jī)會(huì)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過老。
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