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實驗室檢驗技術(shù)要求總結(jié)
  • 更新日期:2023-04-20      瀏覽次數(shù):1061
    • 一、無菌操作要求

        1. 接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。
        2. 進行接種食品樣品時,必須穿專用的工作服、帽及拖鞋,應(yīng)放在無菌室緩沖間, 工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。
        3. 接種食品樣品時,應(yīng)在進無菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?br style="box-sizing: border-box; color: rgb(51, 51, 51); font-family: "Helvetica Neue", Helvetica, Tahoma, Arial, sans-serif; font-size: 16px; white-space: normal; background-color: rgb(255, 255, 255);"/>  4. 進行接種所用的吸管,平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌,打開包裝未使用完的器皿,不能放置后再使用,金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼三次后使用。
        5. 從包裝中取出吸管時,吸管尖部不能觸及外露部位,使用吸管接種于試管或平皿時,吸管尖不得觸及試管或平皿邊。
        6. 接種樣品、轉(zhuǎn)種細菌必須在酒精燈前操作,接種細菌或樣品時,吸管從包裝中取 出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。
        7. 接種環(huán)和針在接種細菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲,必要時還要燒到環(huán)和針與桿 的連接處,接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min,再經(jīng)火焰燒灼。
        8. 吸管吸取菌液或樣品時,應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取,不得直接用口吸。

      二、無菌間使用要求

        1、無菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃,并要密封,不得隨意打開,并設(shè)有與無菌 間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門,另設(shè)有0.5-0.7平方米的小窗,以備進入無菌間后傳遞物品。
        2、無菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作臺面,不得存放與實驗無關(guān)的物品。
        3、無菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊, 打開紫外燈,如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時,需30W紫外燈,距離在1.0m處,照射時間不少于30min,使用紫外燈,應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作,以免引起損傷,燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭,除去上面灰塵和油垢,以減少紫外線穿透的影響。
        4、處理和接種食品標本時,進入無菌間操作,不得隨意出入,如需要傳遞物品,可通過小窗傳遞。
        5、在無菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時,則應(yīng)有過濾裝置。


      三、消毒滅菌要求

        微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等,必須經(jīng)滅菌后方能使用。


        (一)干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法
        1、滅菌前準備
       ?。?)所有需要滅菌的物品首先應(yīng)清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密,如 用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開。
       ?。?)裝培養(yǎng)基的三角瓶塞,用紙包好,試管蓋好蓋,注射器須將管芯抽出,用紗布包 好。

        2、裝放
        (1)干熱滅菌器:裝放物品不可過擠,且不能接觸箱的四壁。
        (2)大型高壓蒸氣鍋::放置滅菌物品分別包扎好,直接放入消毒筒內(nèi),物品之間不能 過擠。

        3、設(shè)備檢查
       ?。?)檢查門的開關(guān)是否靈活,橡皮圈有無損壞,是否平整。
       ?。?)檢查壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位,關(guān)好門和蓋,通蒸氣或加熱后,觀察是式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進行:
        ①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水,立式高壓鍋加水16L(重復(fù)使用時應(yīng)將水 量補足,水變混濁需更換).
        ②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用)。
       ?、凵w好頂蓋擰緊,勿使漏氣;置滅菌器于火源上加熱,立式壓力鍋通上電源,并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣(水沸騰后排氣10-15min)。
        ④關(guān)閉排氣閥,使蒸氣壓上升到規(guī)定要求,并維持規(guī)定時間(按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定)。
       ?、葸_到規(guī)定時間后,對需干燥的物品,立即打開排氣閥排出蒸氣,待壓力恢復(fù)到零時,自然冷卻至 60℃后開蓋取物,如為液體物品,不要打開排氣閥,而應(yīng)立即將鍋去除熱源,待自然冷卻,壓力恢復(fù)至零,溫度降到60℃以下再開蓋取物,以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。

       ?。?)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行:
        ①關(guān)緊鍋門,打開進氣閥,將蒸氣引入夾層進行預(yù)熱,夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動排出。
       ?、?夾層達到預(yù)定溫度后,打開鍋室進氣閥,將蒸氣引入鍋室,鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動排出。
       ?、鄞伿疫_到規(guī)定的壓力與溫度時,調(diào)節(jié)進氣閥,使保持恒定。
       ?、茏匀换蛉斯そ禍刂?0℃再開門取物,不得使用快速排出蒸氣法,以防突然降壓,液體劇烈沸騰或容器爆破。
        ⑤使用自動程序控制式壓力蒸氣滅菌器,在放好物品關(guān)緊門后,應(yīng)根據(jù)物品類別按 動相應(yīng)開關(guān),以便按要求程序自動進行滅菌,滅菌時必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時間以備查,操作要求應(yīng)嚴格按照廠家說明書進行。

        5、滅菌溫度與時間
        (1)干熱滅菌器滅菌溫度160℃,1.5-2h。
       ?。?)壓力蒸氣滅菌 鍋滅菌溫度與時間。
        

            (二)間歇滅菌方法

        1、滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌,某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞,可用此法滅菌。
       ?。?)將欲滅菌物品置于鍋內(nèi),蓋上頂蓋,打開排水口,使器內(nèi)余水排盡。
       ?。?)關(guān)閉排水口,打開進氣門,根據(jù)需要消毒10~20min。
       ?。?)滅菌完畢關(guān)閉進氣門,取出物品待冷至室溫溫度,放入37℃溫箱過夜,次日仍按上述方法消毒,如此三次,即可達到滅菌目的。

        2、血清凝固器使用方法,培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成份時,因高熱會破壞其營 養(yǎng)成份,故用低溫,可使血清凝固,又可達到滅菌目的。
        (1)在使用該法滅菌的血清等分裝時,需嚴格遵守無菌操作,試管、平皿也經(jīng)滅菌后使用。
       ?。?)將培養(yǎng)基按要求使成斜面或高層,加足水后,接上電源,升溫75~90℃1h滅菌,放37℃溫箱過夜,再如此滅菌三次。

        3、煮沸消毒:可用煮鍋或煮沸消毒器,水沸騰后再煮5~15 min,也可在水中加入2%石/炭酸煮沸5 min,加入0.02%甲醛,80℃煮60 min均可達到滅菌目的, 但選用 煮沸消毒的增消劑時, 應(yīng)注意對物品的腐蝕性。

        4、滅菌處理:滅菌后物品,按正常情況已屬無菌,從滅菌器中取出應(yīng)仔細檢查放置,以免再度污染。
       ?。?)物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品使用。
       ?。?)取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無菌物品使用。
        (3)培養(yǎng)基或試劑等,應(yīng)檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態(tài),未達到者應(yīng)廢棄。
       ?。?)啟閉式容器,在取出時應(yīng)將篩孔關(guān)閉。
        (5)取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到污染,不可作為無 菌物品使用。
        (6)取出的合格滅菌物品,應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi),嚴禁與未滅菌物品混放。
       ?。?)凡屬合格物品,應(yīng)標有滅菌日期及有效期限。
       ?。?)每批滅菌處理完成后,記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時間、操作者。

      四、有毒有菌污物處理要求

        微生物實驗所用實驗器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理,一律不得帶出實驗室。

        1、經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴密的容器或鐵絲筐內(nèi),并集中存放在地點,待統(tǒng)一進行高壓滅菌。
        2、經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物,必須經(jīng)121℃30min高壓滅菌。
        3、染菌后的吸管,使用后放入5%煤酚皂溶液或石/炭酸液中,最少浸泡24h(消毒液體不得低于浸泡的高度)再經(jīng)121℃30 min高壓滅菌。
        4、涂片染色沖洗片的液體,一般可直接沖入下水道,烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯 中,經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道,染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后,煮沸洗滌。做凝集試驗用的玻片或平皿,必須高壓滅菌后洗滌。
        5、打碎的培養(yǎng)物,立即用5%煤酚皂溶液或石/炭酸液噴灑和浸泡被污染部位,浸泡半小時后再擦拭干凈。
        污染的工作服或進行烈性試驗所穿的工作服、帽、口罩等,應(yīng)放入專用消毒袋內(nèi),經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。

      五、培養(yǎng)基制備要求

        培養(yǎng)基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長。因為各種微生物對其營養(yǎng)要求不相同,培養(yǎng)目的的不同,各種培養(yǎng)基制備要求如下:

        1、根據(jù)培養(yǎng)基配方的成分按量稱取,然后溶于蒸餾水中,在使用前對應(yīng)用的試劑藥 品應(yīng)進行質(zhì)量檢驗。
        2、PH 測定及調(diào)節(jié):PH測定要在培養(yǎng)基冷至室溫時進行,因在熱或冷的情況下,其PH有一定差異,當測定好時,按計算量加入堿或酸混勻后,應(yīng)再測試一次。培養(yǎng)基 PH值一定要準確,否則會影響微生物的生長或影響結(jié)果的觀察。但需注意因高壓滅菌可 影響一些培養(yǎng)基的 PH 降低或升高,故不宜滅菌壓力過高或次數(shù)太多,以免影響培養(yǎng)基 的質(zhì)量,指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H后再加入。
        3、培養(yǎng)基需保持澄清,便于觀察細菌的生長情況,培養(yǎng)基加熱煮沸后,可用脫脂棉 花或絨布過濾,以除去沉淀物,必要時可用雞蛋白澄清處理,所用瓊脂條要預(yù)先洗凈晾干后使用,避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。
        4、盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器,使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。
        5、培養(yǎng)基的滅菌既要達到滅菌目的,又要注意不因加熱而降低其營養(yǎng)價值,一般121℃15min即可,如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類、血清、明膠等,則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌,一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等,待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。
        6、每批培養(yǎng)基制備好后,應(yīng)做無菌生長試驗及所檢菌株生長試驗。如果是生化培養(yǎng) 基,使用標準菌株接種培養(yǎng),觀察生化反應(yīng)結(jié)果,應(yīng)呈正常反應(yīng),培養(yǎng)基不應(yīng)貯存過久,必要時可置4℃冰箱存放。
        7、目前各種干燥培養(yǎng)基較多,每批需用標準菌株進行生長試驗或生化反應(yīng)觀察,各種培養(yǎng)基用相應(yīng)菌株生長試驗良好后方可應(yīng)用,新購進的或存放過久的干燥培養(yǎng)基,在配制時也應(yīng)測PH,使用時需根據(jù)產(chǎn)品說明書用量和方法進行。
        8、每批制備的培養(yǎng)基所用化學(xué)試劑、滅菌情況及菌株生長試驗結(jié)果、制作人員等應(yīng)做好記錄,以備查詢。

      六、樣品采集及處理要求

        1、所采集的檢驗樣品一定要具有代表性,采樣時應(yīng)首先對該批食品原料、加工、運輸、貯藏方法條件、周圍環(huán)境衛(wèi)生狀況等進行詳細調(diào)查,檢查是否有污染源存在。
        2、根據(jù)食品的種類及數(shù)量,采樣數(shù)量及方法應(yīng)按標準檢驗方法的要求進行。
        3、采樣應(yīng)注意無菌操作,容器必須滅菌,避免環(huán)境中微生物污染,容器不得使用煤 酚皂溶液,用新潔爾滅、酒精等消du藥物滅菌,更不能含有此類消du藥物或抗生素類藥物,以避免殺死樣品中的微生物,所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可應(yīng)用。
        4、樣品采集后應(yīng)立即送往檢驗室進行檢驗,送檢過程中一般不超過3h,如路程較遠,可保存在1~5℃環(huán)境中,如需冷凍者,則在凍存狀態(tài)下送檢。
        5、檢驗室收到樣品后,進行登記(樣品名稱、送檢單位、數(shù)量、日期、編號等),觀察樣品的外觀,如果發(fā)現(xiàn)有下列情況之一者,可拒絕檢驗。

       ?。?)樣品經(jīng)過特殊高壓、煮沸或其他方法殺菌者,失去代表原食品檢驗意義者。
       ?。?)瓶、袋裝食品已啟開者,熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者,即失去原食品形狀者(食物中毒樣品除外)。
       ?。?)按規(guī)定采樣數(shù)量不足者。

        對送檢符合要求的樣品, 檢驗室收到后,應(yīng)立即進行檢驗,如果條件不具備,應(yīng)置4℃冰箱存放,及時準備創(chuàng)造條件,然后進行檢驗。

        6、樣品檢驗時,根據(jù)其不同性狀,進行適當處理。
       ?。?)液體樣品接種時,應(yīng)充分混合均勻,按量吸取進行接種。
       ?。?)固體樣品,用滅菌刀、剪取其不同部位共25g,置于225ml 滅菌生理鹽水或其他溶液中,用均質(zhì)器攪碎混勻后,按量吸取接種。
        (3)瓶、袋裝食品應(yīng)用滅菌操作啟開,根據(jù)性狀選擇上述方法處理后接種。

      七、記錄和報告的要求

        1、檢驗室收到樣品后,首先進行外觀檢驗,及時按照國家標準檢驗方法進行檢驗, 檢驗過程中要認真、負責、嚴格進行無菌操作,避免環(huán)境中微生物污染。
        2、樣品檢驗過程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫出試驗紀錄,以作為對結(jié)果分析、判定的依據(jù),記錄要求詳細、清楚、真實、客觀、不得涂改和偽造。

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